一、常用软件推荐

ImageJ

- 功能：

免费开源的图像处理软件，支持灰度分析、条带选取、面积计算及多组数据对比。

- 适用场景：基础条带定量、背景校正及多通道数据分析。

Quantity One

- 功能：

专业WB分析软件，可精确计算条带分子量，对实验条件要求严格。

- 适用场景：分子量校准、复杂样品分析及多组数据同步处理。

Gel-Pro Analyzer

- 功能：

专门针对WB实验的灰度扫描分析工具，支持自动峰值识别和面积计算。

- 适用场景：高效处理多条带数据，减少手动操作误差。

二、操作步骤与技巧

1. 数据获取与预处理

图像导入：使用软件（如ImageJ）打开WB条带图，必要时转换为灰度图（`Image → Type → 8-bit`）。

背景校正：通过`Process → Subtract Background`或手动选取背景区域扣除。

泳道与条带校正：手动或自动检测泳道，确保条带居中且宽度一致。

2. 条带定量分析

手动分析：使用矩形工具圈选条带区域，通过魔棒工具闭合峰值区域，计算面积（`Analyze → Gels → Plot Lanes`）。

自动分析：部分软件（如Image Lab）支持自动识别泳道和条带，直接生成定量结果。

相对/绝对定量：

相对定量：以内参蛋白（如GAPDH）为基准，计算条带面积比；

绝对定量：通过标准曲线拟合计算未知蛋白浓度。

3. 结果处理与可视化

数据导出：可导出原始图像、柱状图、3D热图等多种格式；

多组对比：通过叠加柱状图或热图直观展示实验组与对照组差异；

归一化处理：使用内参蛋白进行归一化，消除样本间加载量差异。

三、注意事项

实验标准化：

内参蛋白选择需稳定，电泳条件需重复性好；

软件校准：

使用`Analyze → Calibrate`进行亮度校准，确保数据准确性；

结果验证：

可结合质谱或免疫荧光结果交叉验证。

通过以上工具与方法，可高效完成WB条带分析，提升实验效率与数据可靠性。